Eldex 水解/衍生化工作站操作指南（液相和氣相水解）
本節(jié)簡(jiǎn)要概述了工作站的設(shè)置和操作。有關(guān)更多信息，請(qǐng)參閱 Eldex 工作站手冊(cè)。
4.2 物理要求
該設(shè)備需要連接真空和氮?dú)狻?/p>
工作站配備了一個(gè)杜瓦瓶和冷指示器。杜瓦瓶需要干冰。
設(shè)備的反應(yīng)瓶組件可以同時(shí)容納多達(dá) 12 個(gè)樣品管。
4.3 試劑要求
- 6 N HCl（體積中含 1% 酚）
- 氮?dú)猓A(yù)純化級(jí)）
- 甲醇
- 干冰
4.4 樣品準(zhǔn)備
用酸（如 6 N HCl）清洗樣品管。用水徹底沖洗，然后用 100%（未變性）乙醇沖洗。將其在真空下干燥。為了便于識(shí)別，樣品管在放入反應(yīng)瓶之前可以用鉆石鉛筆刻字。
使用注射器或微量移液管將含有 0.5–10 μg 樣品的溶液置入樣品管中。一個(gè)反應(yīng)瓶中可以放置多達(dá) 12 根樣品管。樣品管應(yīng)使用特氟龍鑷子或塑料手套處理，以防止皮膚接觸造成污染。
為了讓烘箱達(dá)到平衡，在進(jìn)行水解之前，將其設(shè)置為 105 °C，預(yù)熱 20–30 分鐘。
4.5 溶液蒸發(fā)至干
在冷指示器周圍的杜瓦瓶中放入干冰。小心地將甲醇或 2-丙醇加入冷阱中。
開(kāi)啟真空泵。
將反應(yīng)瓶的瓶蓋擰緊。將瓶蓋上的按鈕滑動(dòng)到開(kāi)放（綠色在內(nèi)）位置。
將反應(yīng)瓶安裝到工作站上，將瓶子的頂部對(duì)準(zhǔn)真空口，并將瓶子的底部滑入工作站上的黑色“鞋子”中。
打開(kāi)真空閥門。
當(dāng)真空計(jì)讀數(shù)達(dá)到約 65 毫托時(shí)，樣品已正確蒸發(fā)。
為了進(jìn)一步干燥，讓系統(tǒng)保持在此讀數(shù)幾分鐘。
關(guān)閉真空閥門，取下反應(yīng)瓶。擰開(kāi)瓶蓋。
在瓶底添加 200 μL 的 HCl/酚混合液。注意不要讓 HCl 直接進(jìn)入任何管中。
將反應(yīng)瓶蓋保持在開(kāi)放（綠色在內(nèi)）位置，擰緊瓶蓋，并將瓶子安裝到工作站上。
4.6 真空-氮?dú)庋h(huán)
確認(rèn)氮?dú)忾y門關(guān)閉，小心地打開(kāi)真空閥門，直到真空計(jì)讀數(shù)達(dá)到約 1–2 Torr，并且 HCl 開(kāi)始冒泡。此過(guò)程大約需要 20–30 秒。
關(guān)閉真空閥門。
打開(kāi)氮?dú)忾y門，通氮?dú)馕迕腌姟Ｈ缓箨P(guān)閉氮?dú)忾y門。
重復(fù)真空-氮?dú)庋h(huán)三次。在最后一次循環(huán)后保持真空閥門開(kāi)啟。
不要將酸蒸發(fā)至干燥。如果真空計(jì)讀數(shù)低于 500 毫托，請(qǐng)停止通氮?dú)狻?/p>
4.7 后續(xù)操作
在瓶子處于真空狀態(tài)時(shí)，關(guān)閉瓶蓋閥（紅色在內(nèi)）。
關(guān)閉真空閥門，并從工作站上取下瓶子。
將反應(yīng)瓶放入烘箱中。使用手套或鑷子避免接觸烘箱內(nèi)部。
現(xiàn)在可以關(guān)閉工作站的真空和氮?dú)庀到y(tǒng)。
4.8 去除多余的 HCl
在 20–24 小時(shí)后，從烘箱中取出瓶子冷卻。打開(kāi)瓶蓋閥（綠色在內(nèi)）。取下反應(yīng)瓶蓋，使用特氟龍涂層鑷子小心取出樣品管。使用實(shí)驗(yàn)室擦拭紙去除每根管子外部的 HCl。
將樣品管轉(zhuǎn)移到新的反應(yīng)瓶中。
擰緊反應(yīng)瓶蓋。
打開(kāi)瓶蓋閥（綠色在內(nèi)）。將反應(yīng)瓶安裝到工作站上，并小心地打開(kāi)真空閥門。
當(dāng)真空計(jì)讀數(shù)達(dá)到約 65 毫托時(shí)，樣品已正確蒸發(fā)。
為了進(jìn)一步干燥，讓系統(tǒng)保持在此讀數(shù)幾分鐘。
4.9 衍生化
樣品已準(zhǔn)備好進(jìn)行衍生化。可以在 0.1 M HCl 中重溶樣品，并使用 Waters AccQ?Tag 方法進(jìn)行衍生化。有關(guān)更多信息，請(qǐng)參閱下文中描述的水解后樣品處理部分。
本指南包括
- 水解和氨基酸分析的綜合指南
- 水解的介紹
- 純化蛋白質(zhì)和肽的水解
- 食品和飼料樣品的水解
- Eldex 水解/衍生化工作站操作
- CEM Discover SP 微波反應(yīng)系統(tǒng)的氨基酸水解操作
- 使用 Waters AccQ?Tag 化學(xué)法的氨基酸衍生化
- 氨基酸的定量
- 總結(jié)
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