氨基酸水解與分析的綜合指南
介紹
在食品、飼料和生物治療產(chǎn)品的研究、開發(fā)和商業(yè)化過程中，準(zhǔn)確分離、識別和定量氨基酸是一項(xiàng)挑戰(zhàn)。常見的應(yīng)用需要充分的樣品水解，這是分析結(jié)合氨基酸（如肽和蛋白質(zhì)）的工作流程中的重要第一步。水解允許分析釋放出的氨基酸，這些氨基酸可以通過離子交換或反相色譜法進(jìn)行分離。
鑒于樣品準(zhǔn)備流程中的挑戰(zhàn)，本文件編制了用于樣品水解的實(shí)用指南。本文檔中包含的材料僅作為此過程的起點(diǎn)。根據(jù)樣品類型及其復(fù)雜性，可能需要對所述水解方法進(jìn)行修改。有關(guān)水解或特定程序的額外信息或故障排除建議，您應(yīng)聯(lián)系水解儀器的制造商或相關(guān)機(jī)構(gòu)——官方分析化學(xué)家協(xié)會（AOAC）。Waters 無法提供特定樣品類型的指導(dǎo)。
為了通過 HPLC 或 UPLC 分析水解樣品（釋放的氨基酸），Waters 提供了多種解決方案，使用前柱衍生化技術(shù)，以便通過光學(xué)檢測分析氨基酸。由于這是工作流程的一個(gè)關(guān)鍵部分，我們簡要介紹了 Waters HPLC（AccQ?Tag）方法和 UPLC 氨基酸分析（AccQ?Tag Ultra）解決方案。本文檔不包含與 Waters Pico-Tag（苯基異硫氰酸鹽前柱衍生化試劑）氨基酸分析方法相關(guān)的信息。雖然 Pico-Tag 方法仍然可用，但基于 AccQ?Tag 的方法提供了顯著的性能優(yōu)勢，并且推薦用于新的應(yīng)用。
注意：本文件專注于純化蛋白質(zhì)/肽、食品和飼料的水解與氨基酸分析。不針對尿液、血漿、全腸外營養(yǎng)產(chǎn)品或細(xì)胞培養(yǎng)基中氨基酸的分析。有關(guān)這些應(yīng)用的信息，請?jiān)L問 www.waters.com/AAA 和 www.waters.com/Kairos。
一般分析指南和建議
由于氨基酸在環(huán)境中廣泛存在，背景污染很容易導(dǎo)致一些氨基酸的目標(biāo)樣品分析中出現(xiàn) 20 pmol 或更多的污染，特別是絲氨酸（Ser）和甘氨酸（Gly）。可以通過采取特殊預(yù)防措施來減少這種量。或者，如果足夠的樣品被水解以提供每種氨基酸至少 200 pmol，背景污染的貢獻(xiàn)可以限制在 10% 以下。無論如何，為了利用現(xiàn)代衍生化技術(shù)和色譜系統(tǒng)的靈敏度，這些系統(tǒng)的檢測限可能為 1 pmol 或更低，保持潔凈和良好的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)至關(guān)重要。污染源無處不在；臟的玻璃器皿、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、空氣中的塵埃、指紋和滑石粉都是常見的污染源。
雖然沒有單一完美的系統(tǒng)來提高低水平氨基酸分析的整體質(zhì)量，但以下考慮和實(shí)踐有助于改善分析結(jié)果：
- 在 500 °C 下將所有 6 x 50 mm 水解管（零件號：WAT007571）進(jìn)行過夜熱解，以獲得最潔凈的玻璃器皿。取出管子后，用鋁箔（用丙酮清洗過）包裹，并存放在封閉區(qū)域。
- 注意 pipets、一次性尖頭、注射器和其他配件可能引入的污染。
- 在水解之前，使用清潔、無粉末的手套和清潔鑷子進(jìn)行所有操作。使用外科口罩可能是適當(dāng)?shù)摹?/li>
- 始終使用新鮮試劑。每種試劑都可能成為污染源。最佳做法是將剛打開的瓶子分裝到更小、更干凈的容器中。
- 每周檢查試劑質(zhì)量，通過對照空白衍生化進(jìn)行檢查。
- 盡可能使用氣相水解程序。不純的 HCl 可能是水解結(jié)果不可靠的來源。我們發(fā)現(xiàn)最一致的結(jié)果來自常沸 HCl。高純度的試劑級濃鹽酸可能不如常沸等級純凈，并且氯含量顯著較高。
- 測試水和緩沖液成分是否對背景污染有貢獻(xiàn)，作為對照樣品。例如，實(shí)驗(yàn)室用的雙蒸水常常會帶來不可接受的氨基酸水平。為了獲得最佳水質(zhì)，我們強(qiáng)烈推薦使用純化系統(tǒng)（18.2mΩ-cm 水）。
- 水解的適當(dāng)對照空白樣品是經(jīng)過與樣品相同處理的樣品管，包括水解步驟。
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