氨基酸水解與分析的綜合指南

介紹

在食品、飼料和生物治療產品的研究、開發和商業化過程中，準確分離、識別和定量氨基酸是一項挑戰。常見的應用需要充分的樣品水解，這是分析結合氨基酸（如肽和蛋白質）的工作流程中的重要第一步。水解允許分析釋放出的氨基酸，這些氨基酸可以通過離子交換或反相色譜法進行分離。

鑒于樣品準備流程中的挑戰，本文件編制了用于樣品水解的實用指南。本文檔中包含的材料僅作為此過程的起點。根據樣品類型及其復雜性，可能需要對所述水解方法進行修改。有關水解或特定程序的額外信息或故障排除建議，您應聯系水解儀器的制造商或相關機構——官方分析化學家協會（AOAC）。Waters 無法提供特定樣品類型的指導。

為了通過 HPLC 或 UPLC 分析水解樣品（釋放的氨基酸），Waters 提供了多種解決方案，使用前柱衍生化技術，以便通過光學檢測分析氨基酸。由于這是工作流程的一個關鍵部分，我們簡要介紹了 Waters HPLC（AccQ?Tag）方法和 UPLC 氨基酸分析（AccQ?Tag Ultra）解決方案。本文檔不包含與 Waters Pico-Tag（苯基異硫氰酸鹽前柱衍生化試劑）氨基酸分析方法相關的信息。雖然 Pico-Tag 方法仍然可用，但基于 AccQ?Tag 的方法提供了顯著的性能優勢，并且推薦用于新的應用。

注意：本文件專注于純化蛋白質/肽、食品和飼料的水解與氨基酸分析。不針對尿液、血漿、全腸外營養產品或細胞培養基中氨基酸的分析。有關這些應用的信息，請訪問 www.waters.com/AAA 和 www.waters.com/Kairos。

一般分析指南和建議

由于氨基酸在環境中廣泛存在，背景污染很容易導致一些氨基酸的目標樣品分析中出現 20 pmol 或更多的污染，特別是絲氨酸（Ser）和甘氨酸（Gly）。可以通過采取特殊預防措施來減少這種量。或者，如果足夠的樣品被水解以提供每種氨基酸至少 200 pmol，背景污染的貢獻可以限制在 10% 以下。無論如何，為了利用現代衍生化技術和色譜系統的靈敏度，這些系統的檢測限可能為 1 pmol 或更低，保持潔凈和良好的實驗室技術至關重要。污染源無處不在；臟的玻璃器皿、實驗動物、空氣中的塵埃、指紋和滑石粉都是常見的污染源。

雖然沒有單一完美的系統來提高低水平氨基酸分析的整體質量，但以下考慮和實踐有助于改善分析結果：

• 在 500 °C 下將所有 6 x 50 mm 水解管（零件號：WAT007571）進行過夜熱解，以獲得最潔凈的玻璃器皿。取出管子后，用鋁箔（用丙酮清洗過）包裹，并存放在封閉區域。
• 注意 pipets、一次性尖頭、注射器和其他配件可能引入的污染。
• 在水解之前，使用清潔、無粉末的手套和清潔鑷子進行所有操作。使用外科口罩可能是適當的。
• 始終使用新鮮試劑。每種試劑都可能成為污染源。最佳做法是將剛打開的瓶子分裝到更小、更干凈的容器中。
• 每周檢查試劑質量，通過對照空白衍生化進行檢查。
• 盡可能使用氣相水解程序。不純的 HCl 可能是水解結果不可靠的來源。我們發現最一致的結果來自常沸 HCl。高純度的試劑級濃鹽酸可能不如常沸等級純凈，并且氯含量顯著較高。
• 測試水和緩沖液成分是否對背景污染有貢獻，作為對照樣品。例如，實驗室用的雙蒸水常常會帶來不可接受的氨基酸水平。為了獲得最佳水質，我們強烈推薦使用純化系統（18.2mΩ-cm 水）。
• 水解的適當對照空白樣品是經過與樣品相同處理的樣品管，包括水解步驟。

http://ydzhly.com/eldex-corporation-pump/Pico Tag HD/