比利時(shí) Consort EHS1000 系列 水平電泳 EHS1050/EHS1200/EHS11300
關(guān)于水平電泳
凝膠濃度要分離的片段大小范圍將決定凝膠中瓊脂糖濃度的選擇。典型的瓊脂糖濃度為0.5%至3.0%。對(duì)于大DNA片段，需要低濃度的凝膠，而對(duì)于小DNA片段，建議使用高濃度的凝膠。弱凝膠(0.5%瓊脂糖)應(yīng)在低溫下進(jìn)行電泳(例如-4°C)。對(duì)于常規(guī)電泳，建議使用0.75%至1.0%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行廣泛的分離(0.15至15kb)。PCR片段解析通常選擇2…4%的瓊脂糖凝膠。如果凝膠需要隨后拍照，使用低濃度瓊脂糖的薄凝膠(2到3毫米)比厚或高濃度的凝膠更好，后者會(huì)產(chǎn)生增加的渾濁和自發(fā)熒光
電泳緩沖液TAE緩沖液提供了對(duì)長(zhǎng)度大于4kb的片段的最佳分辨率，而對(duì)于0.1到3 kb的片段，應(yīng)選擇TBE緩沖液。TBE的緩沖能力和導(dǎo)電性都比TAE高，因此應(yīng)用于高壓電泳。此外，TBE緩沖液在相同電壓下產(chǎn)生的熱量比TAE少，并且不會(huì)導(dǎo)致顯著的pH漂移。注意:由于TAE的緩沖能力較低，因此在進(jìn)行全長(zhǎng)電泳時(shí)，尤其是在較高電壓下，應(yīng)定期循環(huán)或混合TAE。
溫度影響高電壓電泳會(huì)產(chǎn)生熱量。此外，高導(dǎo)電性緩沖液(如TAE)產(chǎn)生的熱量比低導(dǎo)電性緩沖液更多。在電壓大于175 V的瓊脂糖凝膠電泳中，應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因?yàn)闊崃糠e累可能導(dǎo)致凝膠偽影，如S形遷移前沿，在延長(zhǎng)電泳運(yùn)行中，甚至可能導(dǎo)致瓊脂糖凝膠熔化在高電壓電泳中，應(yīng)避免使用低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠。
RNA遷移率在電泳之前或電泳過(guò)程中，RNA應(yīng)該變性。例如，用甲醛和二甲基亞砜變性的RNA片段可以在中性瓊脂糖凝膠上分離，或者RNA可以在含有氫氧化汞或甲醛的瓊脂糖凝膠上分餾。RNA樣品通常需要較長(zhǎng)的運(yùn)行或容易耗盡的緩沖液，因此有必要循環(huán)緩沖液。通常不應(yīng)在小型凝膠槽上進(jìn)行北分析。
分離性能凝膠濃度、運(yùn)行緩沖液、電壓、溫度、構(gòu)象和溴化乙烯的存在都會(huì)影響分離結(jié)果。為了確定雙鏈DNA的進(jìn)展，常在運(yùn)行緩沖液中加入0.5微克/毫升的溴化乙烯基。該染料的熒光特性使其在紫外燈下能夠可視化。然而，溴化乙烯可能會(huì)使DNA遷移率減慢約15%。另一種選擇是，在電泳后,凝膠可以在溴化乙錠(0.5ug/mlH20)中染色15至60分鐘，然后在紫外透射燈上觀(guān)察或拍照。
