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EHS1000 系列

凝膠濃度 要分離的片段大小范圍將決定凝膠瓊脂糖濃度的選擇。瓊脂糖的典型濃度為 0.5% 至 3.0%。對于大 DNA 片段，需要低百分比的凝膠，而對于小的 DNA 片段，建議使用高百分比的凝膠。弱凝膠（0.5% 瓊脂糖）應(yīng)在低溫（例如 -4°C）下進行電泳。對于常規(guī)電泳，建議使用 0.75% 至 1.0% 的瓊脂糖凝膠進行廣泛的分離（0.15 至 15 kb）。2…通常選擇 4% 瓊脂糖凝膠進行 PCR 片段分辨率。如果隨后必須對凝膠進行拍照，則含有低百分比瓊脂糖的薄凝膠（2 至 3 mm）優(yōu)于厚凝膠或高百分比凝膠。后者產(chǎn)生增加的不透明度和自發(fā)熒光。

電泳緩沖液 TAE 緩沖液可提供 >4 kb 長度片段的最佳分辨率，而對于 0.1 至 3 kb 片段，應(yīng)選擇 TBE 緩沖液。TBE 具有比 TAE 更高的緩沖能力和更低的電導(dǎo)率，因此應(yīng)用于高壓電泳。此外，在同等電壓下，TBE 緩沖液產(chǎn)生的熱量比 TAE 少，并且不允許明顯的 pH 漂移。注意：由于其緩沖能力較低，應(yīng)不時循環(huán)或混合 TAE 以進行全長電泳，尤其是在較高電壓下。

溫度影響 高壓電泳會產(chǎn)生熱量。此外，高電導(dǎo)率緩沖液（如 TAE）比低電導(dǎo)率緩沖液產(chǎn)生更多的熱量。在電壓大于 175 V 的瓊脂糖凝膠電泳中應(yīng)小心，因為熱量積聚會產(chǎn)生凝膠偽影，例如 S 形遷移前沿，并且在長時間的電泳運行中，甚至會熔化瓊脂糖凝膠。高壓電泳時，應(yīng)避免使用低熔點瓊脂糖凝膠

RNA 遷移率 在電泳之前或期間，應(yīng)使 RNA 變性。例如，可以用乙二醛和二甲基亞砜變性的 RNA 片段可以在中性瓊脂糖凝膠上分離，或者可以在含有氫氧化甲基汞或甲醛的瓊脂糖凝膠上分離 RNA。RNA 樣品通常需要更長的運行時間或容易耗盡的緩沖液，因此有必要循環(huán)緩沖液。Northern 分析通常不應(yīng)在小型凝膠槽上運行。

分離性能 凝膠濃度、電泳緩沖液、電壓、溫度、構(gòu)象和溴化乙錠的存在都會影響分離結(jié)果。為了確定雙鏈 DNA 的進展，通常將溴化乙錠 （0.5 μg/ml） 添加到電泳緩沖液中。染料的熒光特性允許在紫外燈下看到條帶。然而，溴化乙錠可能會使 DNA 遷移速率減慢約 15%。作為替代方案，電泳后，可以在溴化乙錠溶液 （0.5 μg/ml H20） 中對凝膠染色 15 至 60 分鐘，然后在紫外透射照明儀上觀察或拍照。