比利時 Consort EHS1000 系列 水平電泳 EHS1050/EHS1200/EHS11300

比利時 Consort EHS1000 系列 水平電泳 EHS1050/EHS1200/EHS11300

關于水平電泳
凝膠濃度要分離的片段大小范圍將決定凝膠中瓊脂糖濃度的選擇。典型的瓊脂糖濃度為0.5%至3.0%。對于大DNA片段,需要低濃度的凝膠,而對于小DNA片段,建議使用高濃度的凝膠。弱凝膠(0.5%瓊脂糖)應在低溫下進行電泳(例如-4°C)。對于常規電泳,建議使用0.75%至1.0%的瓊脂糖凝膠進行廣泛的分離(0.15至15kb)。PCR片段解析通常選擇2…4%的瓊脂糖凝膠。如果凝膠需要隨后拍照,使用低濃度瓊脂糖的薄凝膠(2到3毫米)比厚或高濃度的凝膠更好,后者會產生增加的渾濁和自發熒光

電泳緩沖液TAE緩沖液提供了對長度大于4kb的片段的最佳分辨率,而對于0.1到3 kb的片段,應選擇TBE緩沖液。TBE的緩沖能力和導電性都比TAE高,因此應用于高壓電泳。此外,TBE緩沖液在相同電壓下產生的熱量比TAE少,并且不會導致顯著的pH漂移。注意:由于TAE的緩沖能力較低,因此在進行全長電泳時,尤其是在較高電壓下,應定期循環或混合TAE。

溫度影響高電壓電泳會產生熱量。此外,高導電性緩沖液(如TAE)產生的熱量比低導電性緩沖液更多。在電壓大于175 V的瓊脂糖凝膠電泳中,應謹慎操作,因為熱量積累可能導致凝膠偽影,如S形遷移前沿,在延長電泳運行中,甚至可能導致瓊脂糖凝膠熔化在高電壓電泳中,應避免使用低熔點瓊脂糖凝膠。

RNA遷移率在電泳之前或電泳過程中,RNA應該變性。例如,用甲醛和二甲基亞砜變性的RNA片段可以在中性瓊脂糖凝膠上分離,或者RNA可以在含有氫氧化汞或甲醛的瓊脂糖凝膠上分餾。RNA樣品通常需要較長的運行或容易耗盡的緩沖液,因此有必要循環緩沖液。通常不應在小型凝膠槽上進行北分析。

分離性能凝膠濃度、運行緩沖液、電壓、溫度、構象和溴化乙烯的存在都會影響分離結果。為了確定雙鏈DNA的進展,常在運行緩沖液中加入0.5微克/毫升的溴化乙烯基。該染料的熒光特性使其在紫外燈下能夠可視化。然而,溴化乙烯可能會使DNA遷移率減慢約15%。另一種選擇是,在電泳后,凝膠可以在溴化乙錠(0.5ug/mlH20)中染色15至60分鐘,然后在紫外透射燈上觀察或拍照。

EHS1050迷你電泳


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